DH5α λpir感受态细胞
2024-11-29
| 目录号 | 规格 | 价格 | 是否现货 |
|---|---|---|---|
| YC102-1 | 10×100μl/支 | 240 | 有货 |
| YC102-2 | 20×100μl/支 | 420 | 有货 |
DH5α λpir菌株来源于DH5α，在DH5α大肠杆菌基因组中引入LAMpir，即为DH5α λpir，该菌株可以表达 PIR蛋白，使得含有R6Kg ori复制子的质粒可以在其中正常复制。 DH5α λpir菌株缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选；但DH5α λpir菌株生长速度较慢，在平板培养或液体摇菌时应延长生长时间。DH5α λpir感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×108 cfu/μg DNA。
基因型
F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
操作方法
1.取感受态细胞置于冰浴中（解冻1-2分钟），加入目的DNA（质粒或连接产物），轻轻混匀，在冰浴中放置25分钟。
注意：所使用DNA体积不要超过感受态细胞体积的1/10。
2.将离心管置于42℃水浴中放置60秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2分钟，该过程不要摇动离心管。
3. 向每个离心管中加入700μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃180rpm 摇床振荡培养45-60分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4. 根据实验要求，吸取适量体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。
注意事项
1. 感受态细胞需要在冰中缓慢融化，插入冰中10分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作，避免用移液枪吹吸。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 感受态细胞应保存在-80℃，请避免反复冻融，以免降低感受态细胞的转化效率。
5. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到低。
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